La Asociación Española de Normalización y Certificación (AENOR) ha publicado una nueva versión de la norma UNE-EN ISO 15216-2, que describe un método para la detección de los norovirus de los genotipos I (GI) y II (GII) y del virus de la hepatitis A en muestras de determinados productos alimenticios y de superficies alimentarias, mediante la técnica RT-PCR (reverse-transcriptase polymerase chain reaction) a tiempo real.
Los norovirus y el virus de la hepatitis A (HAV) son agentes importantes de enfermedades virales humanas transmitidas por los alimentos. Dado que no existen métodos de rutina para cultivar norovirus y los métodos de cultivo de HAV no son apropiados para la aplicación de rutina a las matrices alimentarias, la detección de estos patógenos depende de métodos moleculares que utilizan la reacción en cadena de la polimerasa de transcriptasa inversa (RT-PCR).
La norma UNE-EN ISO 15216-2, de la que AENOR acaba de publicar una nueva versión, describe un método para la detección del virus de la hepatitis A (HAV) y de los norovirus de los genogrupos I (GI) y II (GII) a partir de muestras de ensayo procedentes de los siguientes productos alimenticios: frutas blandas, hojas, tallos y bulbos de vegetales, agua embotellada y moluscos bivalvos (BMS) o de superficies alimentarias, mediante el uso de RT-PCR a tiempo real.
Como muchas matrices de alimentos contienen sustancias que inhiben la RT-PCR, es necesario utilizar un método de extracción que produzca preparaciones de ARN altamente limpias, que sean adecuadas para su propósito. El método de extracción varía según la matriz de la muestra.
En el caso de las superficies, los virus se extraen con hisopos. Para frutas blandas y vegetales de hoja, tallo y bulbo, la extracción del virus se realiza mediante elución con agitación seguida de precipitación con PEG / NaCl. Para el agua embotellada, se utiliza la adsorción y elución, usando membranas cargadas positivamente, seguido de concentración por ultrafiltración y en el caso de los moluscos bivalvos (BMS), los virus se extraen de los tejidos de las glándulas digestivas mediante el tratamiento con una solución de proteinasa K. Todas las matrices comparten un método de extracción de ARN común, basado en la interrupción de la cápside del virus con reactivos caotrópicos seguido de la adsorción de ARN a partículas de sílice.
La UNE-EN ISO 15216-2 Microbiología de la cadena alimentaria. Método horizontal para la determinación del virus de la hepatitis A y norovirus utilizando RT-PCR en tiempo real. Parte 2: Método para la detección (ISO 15216-2:2019) es la versión oficial, en español, de la Norma Europea EN ISO 15216-2:2019 y sustituye a la Norma UNE-CEN ISO/TS 15216-2:2013, que ha sido revisada técnicamente.
Los principales cambios, que se consideran menores, respecto a la versión de 2013 son:
- Se ha añadido el requisito de utilizar un tampón adecuado para la dilución de los materiales de control;
- Se ha cambiado el método para generar el ARN del virus de control de proceso para la curva estándar;
- Se han añadido puntos de corte con una temperatura y parámetros de tiempo definidos en los métodos de extracción;
- La terminología ha cambiado de "eficiencia de amplificación" a "inhibición de RT-PCR";
- Se han agregado reacciones adicionales de RT-PCR en tiempo real para muestras de ARN y controles negativos;
- Se han añadido las características del método y los resultados de los estudios de validación del método.
El método descrito en esta norma no se ha validado para la detección de los virus objeto de estudio en otros productos alimenticios (incluidos los productos alimenticios compuestos de múltiples componentes), ni para ninguna matriz diferente, ni para la detección de otros virus en los productos alimenticios, las superficies alimentarias ni en otras matrices diferentes.
Fuente Aenor